產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
低表達量His標簽蛋白質(zhì)純化試劑盒。
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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MHQ101 |
BcMag公司? 低表達His標簽蛋白純化試劑盒 |
5毫升 |
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MHQ102 |
BcMag公司? 低表達His標簽蛋白純化試劑盒 |
10毫升 |
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產(chǎn)品屬性 |
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組成 |
表面連接有 Ni2+的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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穩(wěn)定性 |
適用于pH 4-11,100%乙醇，100%甲醇，8M尿素，6M鹽酸胍， 20 mM DTT, 20mM EDTA |
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濃度 |
100 mg/ml (1% NiSO4.6H2O) |
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結(jié)合能力 |
>2mg His-標簽 GFP /ml 磁珠 |
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儲存 |
儲存在 4°C |
運輸條件: 常溫運輸
儲存條件: 在4oC儲存試劑盒。
BcMag ? 低表達量His標簽的蛋白質(zhì)純化試劑盒使用還原試劑兼容的磁珠純化His標記的蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)可能存在有非特異性結(jié)合問題，例如低表達蛋白質(zhì)或靶蛋白與細胞蛋白質(zhì)結(jié)合（圖1）。磁珠是使用納米級超順磁性氧化鐵作為核心制造的，并完全由高純度二氧化硅外殼包裹，確保氧化鐵沒有浸出問題。我們專有的螯合劑固定在其表面上，并與Ni2+離子牢固結(jié)合，從而對還原劑產(chǎn)生高抗性。由于二氧化硅材料產(chǎn)生的側(cè)鏈比其他固體基質(zhì)如瓊脂糖要少很多，因此純惰性二氧化硅產(chǎn)生的非特異性結(jié)合較少。此外，磁珠結(jié)合了BcMag ? 低表達His標記的蛋白質(zhì)純化試劑盒的所有優(yōu)點（低成本，簡單，高特異性和容量）和磁性，可進行有效的手動或自動快速高通量純化。
工作流程（圖2）
用磁珠進行純化很簡單（圖2）。將磁珠與樣品混合，并連續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育足夠的時間。在混合過程中，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，使目標分子與固定化配體相互作用。孵育后，收集磁珠并使用磁力架將其與樣品分離。然后用咪唑洗脫超純His標記的重組蛋白。
優(yōu)勢及特點
l 磁珠表現(xiàn)出比多孔載體更少的非特異性結(jié)合率。
l 穩(wěn)定的共價鍵，最少的配體泄漏
l 在含有高達20mM EDTA和20mM還原試劑的情況下，磁珠不會發(fā)生鎳離子浸出現(xiàn)象。
l 與細胞培養(yǎng)基中過量表達、或分泌蛋白的純化兼容。
l 極高的蛋白純度
l 性價比高：無需使用純化柱、過濾器、有機試劑或進行重復移液。
l 高通量：與許多不同的自動化液體處理系統(tǒng)兼容。
產(chǎn)品應用
l 研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能
l X射線晶體學的重組蛋白的制備
l 是研究蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)或DNA相互作用的理想選擇材料
l 在免疫研究中，提高抗體與對應蛋白的結(jié)合和能力
l 即使使用粗細胞裂解液，也能有效篩選出表達的蛋白質(zhì)
l His標簽蛋白的微量純化
背景信息
背景信息
多聚組氨酸標簽，也稱為6xHis標簽，和His標簽，是從各種表達系統(tǒng)（包括細菌、酵母、植物細胞和哺乳動物細胞系統(tǒng)）中純化重組蛋白的通用工具。該標簽是位于重組蛋白的N或C末端的包含六個或更多個連續(xù)組氨酸的殘基。由于這個氨基酸鏈體積非常小，His標簽具有幾個獨特的特性，包括較少的免疫原性、親水性以及可在天然和變性條件下都可發(fā)揮作用的用途廣泛性。此外，不需要從重組蛋白上切割標簽，因為它不會干擾其融合蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。His標簽的純化原理基于固定化金屬離子親和層析（IMAC）。
固定化金屬離子親和層析（IMAC）是一種快速的親和純化層析技術(shù)，是基于攜帶his標簽的重組蛋白質(zhì)對Ni2+或Co2+的親和力從而達到分離目的，而Ni2+或Co2+則被結(jié)合固定到固相基質(zhì)表面，例如珠狀瓊脂糖或純化柱。在pH 7-8時，His標簽蛋白將與Ni2+或Co2+結(jié)合。His標簽重組蛋白質(zhì)的結(jié)合反應受到各種自變量的影響，如pH、溫度、鹽類型、鹽濃度、固定化的金屬和配體密度以及蛋白質(zhì)大小?？赏ㄟ^降低pH梯度、增加咪唑濃度或在緩沖液中加入EDTA螯合劑來洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。該技術(shù)是快速、直接捕獲和純化帶標簽重組蛋白的，高性價比的理想工具。
非特異性結(jié)合是從各種表達系統(tǒng)中純化his標簽蛋白的潛在問題，尤其是從低表達的重組his標簽蛋白或與其他細胞蛋白相互作用的高表達蛋白中純化his標簽蛋白。許多因素可能導致非特異性結(jié)合。其中，低表達蛋白或與內(nèi)源蛋白結(jié)合的標記蛋白可能導致嚴重的非特異性結(jié)合。His標簽的蛋白質(zhì)與IMAC的金屬離子的結(jié)合取決于電荷。當樹脂的his標簽結(jié)合位點由于其低豐度而僅部分結(jié)合目標蛋白質(zhì)時，會發(fā)生非特異性結(jié)合。其余的結(jié)合位點與其他帶輕微電荷的蛋白質(zhì)（如富含組氨酸的蛋白質(zhì)）發(fā)生非特異性相互作用，導致純化出的蛋白出現(xiàn)雜質(zhì)。許多證據(jù)表明，在結(jié)合和洗滌緩沖液中還原試劑和非離子洗滌劑可以顯著降低高度非特異性結(jié)合，并獲得更純凈的蛋白質(zhì)。IMAC應用中最常用的螯合劑是亞氨基二乙酸酯（IDA）或氮基三乙酸（NTA）。這些螯合劑不能與還原劑如DTT（二硫蘇糖醇），β-me（β-巰基乙醇）和TCEP（三（2-羧乙基）膦）一起使用，因為還原劑可以從這些樹脂中剝離金屬，導致蛋白質(zhì)結(jié)合能力的快速喪失。
此外，這些螯合劑主要固定在傳統(tǒng)的親和色譜基質(zhì)上，如瓊脂糖樹脂或色譜柱。這些固體基質(zhì)使純化過程繁瑣，耗時，無法處理非常微小的樣品，并且難以適應自動化系統(tǒng)。Bioclone推出了一種功能強大的基于磁珠的IMAC系統(tǒng)來解決這些問題。
參考文獻
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