產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
用于超靈敏熒光分析的醛基銪熒光磁珠
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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GA101 |
2.5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GA102 |
2.5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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GA103 |
5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GA104 |
5 μm BcMag? Aldehyde-Activated Europium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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Fluorescence dye properties
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Fluorophore |
Fluorescence color |
Excitation (nm) |
Emission (nm) |
Fluorescence lifetime (?) (μsec) |
Stokes shifts (nm) |
Selection of Emission Filter |
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Europium ion (Eu3+) |
Red |
340 |
615 |
730 |
275 |
620/40 |
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產(chǎn)品屬性 |
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磁珠大小 |
2.5μm 直徑; 或5μm直徑 |
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磁珠數(shù)量 |
~1.47 x 108 beads/mg (2.5μm) ~ 5 x 107 beads /mg (5μm) |
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穩(wěn)定性 |
短期保存 (<1 hour): pH 3-11; 長期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 大多數(shù)有機溶劑 |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁力類型 |
超順磁性 |
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濃度 |
30 mg/ml (1 mM ETDA, pH 7.0) |
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功能團密度 |
2.5μm 磁珠 |
~240 μmole / g |
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5μm 磁珠 |
~200 μmole / g |
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儲存 |
儲存在 -20°C. |
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BcMag?醛基銪熒光磁珠（圖1）是具有高密度醛基官能團的時間分辨熒光（TRF）磁珠。磁珠表面的醛基可以與蛋白質的N-末端或賴氨酸殘基上的伯胺基自發(fā)反應，形成中間的席夫堿絡合物。還原胺產(chǎn)生的固定化反應始于醛基和胺基之間產(chǎn)生初始產(chǎn)物聚希夫堿復合物，然后通過添加氰基硼氫化鈉（NaCNBH3）將其還原為仲胺，這樣在磁珠和配體之間就可以產(chǎn)生穩(wěn)定的胺鍵。在含有20-30%DMSO或DMF的水性或有機溶劑中，生理堿性環(huán)境（pH 7.2至9）下，偶聯(lián)反應僅需一步2至6小時的反應過程。與抗體和正常蛋白質的偶聯(lián)效率通常大于85%，而且每毫克磁珠可以結合15至20μg蛋白。
這種磁珠通過結合活性醛基官能團、時間分辨熒光染料和磁性特性，提供了一種高靈敏度的檢測方法。它們由納米級超順磁性氧化鐵和銪金屬核心組成，完全被高純度二氧化硅外殼包裹，確保鐵氧化物和銪金屬不會出現(xiàn)浸出問題。這種親水磁珠具有極低的非特異性吸附率，在各種緩沖液中具有良好的分散性和易于處理的特點。
盡管傳統(tǒng)的熒光顯色技術在過去幾十年中得到了廣泛應用，但它們在適用性和效率方面仍存在一些局限性：1.激發(fā)帶較窄，背景信號強。2.斯托克斯位移較小，容易造成自熄現(xiàn)象。3.熒光對環(huán)境因素敏感，如金屬離子濃度、pH值、溫度和溶劑極性。4.熒光強度不足，不能檢測單個生物分子。5.熒光間歇性（閃爍）影響分子檢測的某些數(shù)據(jù)處理過程，造成誤差。6.由于疏水性，容易聚集。
BcMag? TR-FRET（時間分辨熒光共振能量轉移）測定方法
BcMag? TR-FRET測定方法與傳統(tǒng)的FRET（F?rster共振能量轉移）測定方法不同，它利用時間分辨熒光磁珠（BcMag? TR-Magnetic Beads）作為熒光供體團。供體和受體可以是兩個蛋白質、兩個DNA鏈、抗原、抗體或配體或其它受體。在一定的時間延遲后（通常為50至100秒），當供體和受體分子靠近并以時間分辨方式進行監(jiān)測時，通過熒光共振能量轉移產(chǎn)生信號。在BcMag? TR-FRET測定方法中，微量的分析物可以通過時間分辨磁珠輕松地從樣品中富集，從而提高靈敏度。該測定方法消除了由樣品和塑料微孔板引起的所有熒光背景影響，以及直接激發(fā)受體所產(chǎn)生的背景影響。因此，BcMag? TR-FRET測定方法的信噪比非常高，背景值非常低。此外，該測定方法不需要清洗步驟。BcMag? TR-FRET測定方法在高通量篩選的生物分析中具有顯著的優(yōu)勢，如測定靈活性、可靠性、提高測定靈敏度、更高的通量和更少的假陽性/假陰性結果。
由于其獨特的特性，銪熒光團是一種高效的時間分辨熒光標記。它在340nm處激發(fā)，發(fā)出615nm的紅色熒光，具有長熒光壽命（730微秒）和較大的斯托克斯位移（275nm）。利用這些特性，時間分辨熒光檢測可以顯著降低樣品的熒光背景，并提高信噪比，使其比傳統(tǒng)熒光染料具有更高一個數(shù)量級的檢測能力。BcMag? 醛基銪熒光磁珠是TR-FRET測定中優(yōu)秀的供體材料。
TR-FRET磁性珠測定方法的工作流程（圖2）
1.將與抗體結合的供體磁珠與細胞裂解液混合，并在連續(xù)旋轉下孵育足夠的時間。在混合過程中，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，使目標分析物能夠與供體磁珠結合。2. 孵育后，使用磁力架將磁珠從樣品中收集和分離。3. 添加與目標分析物結合的受體，并在連續(xù)旋轉下孵育足夠的時間。4. 多種微孔板讀數(shù)儀進行TR-FRET測定。
優(yōu)勢和特點：
1. 本款磁珠具有在一種磁珠上，可以同時表現(xiàn)出雙重功能的特點：分離/預濃縮和檢測分析物，能夠在同一磁珠上快速、簡便、穩(wěn)定和高通量地從復雜生物樣品中分析痕量分析物。
2. 超高的靈敏度。檢測限值低至10 pg/mL，而典型熒光測定的檢測限值為100 pg/mL。
3. 極高的光穩(wěn)定性和耐光漂白性。所有的鑭系螯合物或香豆素分子以及氧化鐵完全封閉在磁珠的內部，而不僅僅是在磁珠表面上。這種保護環(huán)境可以防止氧化鐵和染料溶解到水介質中，使磁珠對溶劑、溫度、pH等外部條件的敏感性降低。
4. 高熒光強度。由于單個磁珠含有高濃度的鑭系螯合物，并且鑭系螯合物本身具有40%到90%的高量子產(chǎn)率，因此磁珠具有超強的熒光強度，可顯著提高分析靈敏度，而無需信號放大。這種高亮度的磁珠也是時間分辨FRET分析的完美供體。
5. 鑭系螯合物或香豆素具有較大的斯托克斯位移（>250nm）、較窄的發(fā)射帶（-10nm帶寬）和較長的熒光壽命（μs），這大大降低了背景影響并提高了信號和干擾信號的比例。
6. 大多數(shù)生物檢測過程的ELISA測定可以轉化為HTRF測定。
7. 測定過程中無需清洗步驟。
8. 磁珠具有親水性二氧化硅表面，通過具有不同長度連接劑的不同功能基團進行接合，可高效地結合多種配體，如多肽、蛋白質、抗體、小分子、碳水化合物、寡核苷酸、DNA/RNA等。
9. 由于磁珠的磁性特性，熒光磁珠非常適合于高通量自動化。
